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    DNA提取純化試劑盒適用于哪些材料

    更新日期: 2024-01-19
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    DNA提取純化試劑盒適用于各種材料,包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等無細胞材料。
    1、如果有N個樣品,標記N+2個1.5-2mL螺旋蓋塑料離心管,多出的一個為陽性對照,一個為陰性對照。為避免污染,建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做個標記,以在后續操作時區別向心面和離心面。然后在離心管中分別加0.2mL液體樣品(血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等),陽性對照和陰性對照。
    1.1、如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品,則將拭子放入0.2mL自備生理鹽水中擠壓出液體,然后取0.2mL進行提取。
    1.2、如果是糞便等半固定樣品,則取約0.3mL的樣品,加入0.3mL自備生理鹽水。震蕩重懸,離心取0.2mL上清進行提取。
    1.3、如果血液,細胞培養液等含細胞的液體??梢噪x心用上清,也可以直接取 用,但后者提取的病毒DNA中會有少量細胞的基因組DNA污染(但不影響PCR)。血漿的抗凝劑必須是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD時由于所加入ACD會增加體積,樣品會被稀釋。得到的病毒滴度會比使用EDTA低15%左右。血漿按0.6mL/管的量分裝保存,以避免反復凍融。
    1.4、如果樣品是實體組織或培養細胞,則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心, 用0.2mL上清液(含病毒)進行提取,但此種情況下后得到的病毒DNA不可避免的會含有少量基因組DNA污染(但不影響PCR檢測)。
    1.5、如果液體樣品中的病毒需要富集,可以使用1.5mL上述方法得到的液體在4℃24000g冷凍離心60分鐘,移棄1.3mL、用剩下的0.2mL繼續操作。
    2、加入0.6mLDNA 病毒裂解液到各離心管中,振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘裂解病毒。注意:DNA病毒裂解液在4℃放置后可能會產生沉淀,使用前必須放在 65℃水浴使沉淀溶解并充分搖勻后再取用。
    3、加入0.8mL上柱結合液到離心管中,顛倒混勻后轉移一半的混合液(0.8mL) 到離心吸附柱中,室溫放置2分鐘。
    4、12000rpm室溫離心1分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。
    5、將剩余的另外一半裂解液(0.8mL)轉移到離心吸附柱中,室溫放置2分鐘。
    6、12000rpm 室溫離心1分鐘,棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集 管中。
    7、加入0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中。12000rmp室溫離心1分鐘。棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。
    8、加入0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中。12000rmp室溫離心1分鐘。棄收集管中的穿透液,把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌,可以跳過。
    9、12000rpm室溫離心1分鐘(干甩),棄含穿透液的離心管。
    10、將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的RNase-free的1.5mL離心管中。在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100uL DNA洗脫液3.0,然后室溫放置2分鐘。
    11、12000rpm室溫離心1分鐘,離心管中的溶液即為病毒DNA溶液。
    12、DNA樣品可以直接用于PCR,也可放-20℃長期保存。 
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